工作原理

蛋白質(zhì)定量是蛋白質(zhì)研究的基礎(chǔ)工作之一。BCA (bicinchoninic acid)是理想的蛋白質(zhì)定量方法，是當(dāng)前比Lowry法更專用于檢測總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。

BCA Protein Assay Kit?是一種用于蛋白質(zhì)濃度測定的試劑盒，它基于BCA（Bicinchoninic Acid）法進行蛋白質(zhì)定量分析。蛋白質(zhì)在堿性條件下，將 Cu ²⁺還原為 Cu ⁺，Cu ⁺與 BCA 試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，該復(fù)合物的顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，從而可以通過測量其在562nm處的吸光度來確定蛋白質(zhì)的濃度。該方法快速靈敏、穩(wěn)定可靠，不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，對不同種類蛋白質(zhì)檢測的變異系數(shù)非常小。BCA 蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)實現(xiàn)了蛋白濃度測定簡單、穩(wěn)定性高、靈敏度高和兼容性高的特點。

產(chǎn)品介紹

C05-02001

產(chǎn)品優(yōu)勢

準(zhǔn)確靈敏，線性范圍廣：BCA 試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是 10-2000μg/mL。

快速：45 分鐘內(nèi)完成測定，比經(jīng)典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。

經(jīng)濟實用：在微孔板中進行測定，可大大節(jié)約樣品和試劑用量。

效果穩(wěn)定：不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響，檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠小于考馬斯亮藍。

使用說明
1. 配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按體積比A : B (50：1)配制適量BCA工作液，充分混勻。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。
2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取10微升標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至100ul（標(biāo)準(zhǔn)品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20ul加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加PBS補足到20ul。
3. 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，補加PBS到20ul。
4. 各孔加入200ul BCA工作液，37℃放置30分鐘。
5. 冷卻到室溫，用酶標(biāo)儀562nm測定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出蛋白濃度。

注意事項
1. 在低溫條件或長期保存出現(xiàn)沉淀時，可攪拌或37℃溫育使溶解, 如發(fā)現(xiàn)細菌污染則應(yīng)丟棄。
2. 樣品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸銨、脂類會影響檢測結(jié)果，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒；高濃度的去垢劑也影響實驗結(jié)果，可用TCA沉淀去除干擾物質(zhì)。
3. 要得到更為精確的蛋白濃度結(jié)果，每個蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔, 每次均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4. 當(dāng)試劑A和B混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失，工作液在密閉情況下可保存1周。
5. 需準(zhǔn)備37℃水浴或溫箱、酶標(biāo)儀或普通分光光度計，測定波長為540-595nm之間，562nm最佳。酶標(biāo)儀需與96孔酶標(biāo)板配套使用。使用分光光度計測定蛋白濃度時，試劑盒測定的樣品數(shù)量會因此而減少。使用溫箱孵育時，應(yīng)注意防止因水粉蒸發(fā)影響檢測結(jié)果。

文獻引用精選